انتقال وکتور psvm حاوی ژن نوترکیب اینترفرون بتا به سلول های dhfr- cho و بررسی بیان ژن اینترفرون بتا با استفاده از روش real time pcr
پایان نامه
چکیده
اینترفرون ها نخستین بار در سال 1957 شناسایی گردیده و واژه ی اینترفرون فعالیت زیستی مواد محلولی را تعریف نموده که در فرایند همانندسازی ویروس ها تداخل ایجاد می نمایند. اینترفرون ها در پاسخ به انواع آنتی ژن ها از جمله rna ویروسی، تولیدات باکتریایی و پروتئین های توموری بیان می گردند. به طور کلی اینترفرون ها را بر اساس توالی اسیدآمینه ای به سه گروه ifn?، ifn? و ifn? تقسیم می کنند. اینترفرون ها واجد تأثیرات گسترده ای از جمله خواص ضد توموری، ضد ویروسی و ضد التهابی می باشند. امروزه اینترفرون بتا به عنوان یکی از مهمترین داروهای مورد استفاده در بیماری های خود ایمنی از جمله مولتیپل اسکلروزیس کاربرد دارد. از این رو تلاش های گسترده ای در جهت افزایش پایداری mrna، افزایش میزان ترجمه و بهینه سازی شرایط تولید این داروی مهم صورت گرفته است. در این مطالعه پنج کانسترکت نوترکیب که با استفاده از روش های مهندسی ژنتیک تولید گردیده مورد مطالعه قرار گرفتند. هر یک از این کانسترکت ها حاوی جهشی ویژه بوده که شامل حذف 18 نوکلئوتید در ناحیه ی utr?3 و ایجاد دو جهش جابه جایی در توالی کزاک به منظور نزدیک کردن آن، به توالی محافظت شده می باشد. کانسترکت بعدی حاوی جهش در توالی areموجود در ناحیه ی کد کننده (crid) بوده که سبب القای پایداری آن می گردد. کانسترکت بعدی حاوی یک جهش در ناحیه ی کدکننده ی اینترفرون بوده به طوری که کدان 101 از gtc به ttc تغییر یافته و در نتیجه اسیدآمینه ی والین به فنیل آلانین تغییر می یابد و در کانسترکت نهایی علاوه بر جهش 101 واجد جهش دیگری در کدون 27 بوده به طوری که agg به acg تغییر یافته است. ژن اینترفرون نوترکیب در وکتور psvm- dhfr کلون گردیده است. در ادامه ترانسفورماسیون پلازمید نوترکیب psvm- dhfr در لاین سلولی cho-dhfr- با استفاده از کیتlipofectamine صورت پذیرفت. تغییرات اعمال شده سبب تغییر در بیان ژن اینترفرون بتا شده که با استفاده از real time pcr مورد بررسی قرار گرفت. بررسی های نهایی انجام شده نشان داد که به ترتیب جهش های موجود در کدان 101، کدان 101 و 27 وجهش موجود در توالی crid بیشترین تأثیر را بر روی بیان اینترفرون بتا داشته اند.
منابع مشابه
ایجاد وکتورهای تداخلی یوکاریوتی از pSVM با انتقال ناحیه‌ی توالی اتصال در ژنوم (attB) به آن
زمینه و هدف: سالیان زیادی است که انواع مختلفی از سلول‌های تخمدان هامستر چینی (CHO) غالباً برای تولید اکثر محصولات دارویی استفاده می‌شود. تولید دائمی در این سلول‌های میزبان، یک چالش بزرگ است. هدف از این مطالعه، همسانه سازی ناحیه ی توالی اتصال در ژنوم باکتری (attB) در وکتور pSVM با استفاده از سیستم نوترکیبی phiC31 برای بقای طولانی وکتور در سلول‌های CHO بوده است. روش بررسی: در این مطالعه تجربی آ...
متن کاملبررسی بیان ژن CYP1A1 در بیماران مبتلا به سرطان مری با استفاده از روش Real-time PCR
زمینه و هدف: سرطان مری توزیع و شیوع جغرافیایی بسیار متغیری نسبت به سایر انواع سرطان های شایع دارد. شیوع سرطان مری در ایران بسیار بالا می باشد. عوامل ژنتیکی مخصوصاً انکوژن‌ها از جمله عواملی است که در ایجاد و پیشرفت سرطان در بافت‌ها موثر هستند. در این میان ژن CYP1A1 (سیتوکروم P450، خانواده ١، زیر خانواده A، پلی پپتید ١) یکی از زیر خانواده های سیتوکروم P450 است که در سرطان مری نقش دارد، لذا هدف این...
متن کاملبررسی جهش‌های ژن بتا گلوبین در بیماران تالاسمی با استفاده از روش PCR-SSCP
چکیده زمینه و هدف: بتا تالاسمی یکی از شایع ترین بیماری های ژنتیکی در ایران است و بیش از دو میلیون حامل بتا تالاسمی در ایران وجود دارد. شناسایی جهش‌های ژن بتاگلوبین برای برنامه‌های تشخیصی و مدیریتی معین مانند تشخیص پیش از زایمان بیماری بتاتالاسمی ضروری است. در کشور ما روش PCR-ARMS(PCR-amplification refractory mutation system) بطور گسترده برای شناسایی جهش‌های ژن بتا گلوبین استفاده می‌شود. روش...
متن کاملافزایش بیان ژن BIM در بیماران مبتلا به Multiple Sclerosis با روش Real Time PCR
مقدمه و هدف: بیماری مالتیپل اسکلروزیس (MS)، به‌عنوان یک بیماری خودایمن سیستم اعصاب مرکزی شناخته می‌شود. یافته‌های به‌دست‌آمده حاکی از نقش سیستم ایمنی و عوامل مرتبط با تنظیم عملکرد این سیستم در بروز بیماری‌های سیستم اعصاب مرکزی مانند مالتیپل اسکلروزیس است. در این میان، ژن Bim به‌عنوان یکی از ژن‌های دخیل در تنظیم فعالیت‌های زیستی سلول مانند آپوپتوز، ازجمله ژن‌های کاندید مرتبط با این بیماری گزارش ...
متن کاملبهبود بیان پروتئین اینترفرون بتای انسانی در سیستم بیان گذرای سلول های cho dg۴۴ با ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی توالی ناپایدار کننده ی انتهای ژن اینترفرون بتا (crid)
مقدمه: بهینه سازی تولید اینترفرون بتا در سلول های cho (chinese hamster ovary) به عنوان یک میزبان بیانی که قادر به تولید پروتئین دارویی با کیفیت بالا می باشد، جهت کاهش قیمت و سرعت تولید این پروتئین نوترکیب دارویی از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف این مطالعه، بررسی تأثیر پایداری mrna به واسطه ی ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی در ناحیه ی ناپایدارکننده ی انتهای پروتئین اینترفرون بتا (crid یا coding r...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه اصفهان - دانشکده علوم
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023